玉米浆和糖蜜生物素含量测定

    由于谷氨基酸是生物素缺陷性，故在一定条件下，生物素浓度高低与谷氨酸生长菌的生长量呈线性关系。利用该特性，测定玉米浆和糖蜜中生物素含量，为车间生产提供指导。
    谷氨酸发酵生产中，玉米浆和糖蜜作为主要有机氨源和生物素的来源，是非常重要的源材料。因源料来源及处理方法不同而造成每批玉米浆及糖蜜的生物素含量不稳定，从而对谷氨酸发酵产酸，糖酸转化率等造成重大影响，因此如何准确地测定二者生物素含量至关重要。由于谷氨酸菌种是生物素缺陷型，故在一定条件下，生物素浓度的高低与谷氨酸生产菌的生产量呈线性关系。因此，采用微生物法，测定玉米浆及糖蜜的生物素含量，从而为大罐发酵生产提供指导。

1.材料和方法
1.1菌种
　　谷氨酸生产菌
1.2一级种子培养基
　　葡萄糖2.5%，玉米浆2.6%，磷酸铵二钾0.12%，硫酸镁0.06%，尿素0.55%，PH7.0.
1.3生物鉴定用菌的培养基配方
　　分析葡萄糖14.5%硫酸镁0.065%，磷酸铵二钾0.16%氯化钾0.03%，硫酸亚铁，硫酸锰个0.0002%，PH7.0（自然PH），在0.1Mpa压力下灭菌15min，备用。
1.4 标准生物素溶液的配置
　　精确称取10Mg试剂生物素，定容500ml，在吸取1ml上诉稀释液，定容到500ml,得到0.04μg/ml标准样，在0.1Mpa压强下灭菌15min后备用。
1.5标准曲线的绘制
　　取500ml无菌三角瓶，按表1分别不同量的鉴定用培养基溶液，各加不同量的生物素标准样品，已消20%尿素及菌液。于32℃±1℃摇床培养12h，下摇床后摇匀，用581-s型光电比色计，以650nm滤光板测定光密度（OD）。以样品OD于空白OD之差为纵轴，以生物素含量为横轴，画出标准曲线。

    1.6样品中生物素含量的测定
　　取灭菌后的500ml三角瓶，加入18ml鉴定用培养基，0.1ml蒸馏水。0.5ml（20%）尿素和0.4ml一级种子，在加上1ml带测定样品（已稀释并灭菌），其他操作同上，浆样品测得的OD值去空白的OD值，即得实测得OD值。样品的稀释倍数，依生物素含量的多少而异。一般应控制在含10μg/L一下为宜。
结果计算：
　　样品OD值-空白OD值=实测OD值，根据回归函数计算X值，将X值*稀释倍数即得出样品生物素含量（μg/L）。
    结果与讨论

　　根据表2作标准曲线，如图1.对结果进行线性回归，得到回归函数：Y=0.0154X+0.005R²=0.9972
　　待测玉米浆样：V_H(X)=8.12×100=812μg/kg
　　待测甘蔗糖蜜样：V_H(X))=7.47×500=3735μg/kg

　　我们将实验结果用来指导发酵生产，取得了良好的效果。车间在更换玉米浆和糖蜜批次时，发酵培养基配方调整及时准备。（本文搜集整理于网络，如有侵权之处，请联系我们删除。）